AGAR BILE VERMELHO VIOLETA LACTOSE 500G

Ágar Bile vermelho violeta lactose (VRB)

Utilizado para a contagem de coliformes em alimentos e produtos lácteos conforme a Associação Americana de Saúde Pública (American Public Health Association, APHA, por sua sigla em inglês).

Princípios do Procedimento:
A Digestão Enzimática de Gelatina é a fonte de carbono, nitrogênio, vitaminas e minerais no Ágar VRB. O Extrato de Levedura fornece vitaminas do complexo B que estimulam o crescimento bacteriano. A Mistura de Sais Biliares e Cristal Violeta inibem a maioria das bactérias Gram-positivas. A Lactose é a fonte de carboidrato. O Vermelho Neutro é o indicador de pH. O ágar é o agente solidificante.

Precauções:

• Somente para o uso em laboratório;
• Irritante para os olhos, sistema respiratório e pele.

Modo de Preparo:

1. Suspenda 41,5g do meio em 1L de água purificada;
2. Aqueça, agitando frequentemente e ferva por 2 minutos. NÃO AUTOCLAVE;
3. Resfrie o meio a 45 - 46ºC e dispense 15 - 20mL em placas de Petri de 100mm contendo o inóculo;
4. Após a solidificação do meio inoculado, adicione uniformemente uma sobrecamada de 4mL do meio resfriado (45 -46°C).

Especificações de Controle de Qualidade:

Aparência do meio:

• Aparência Desidratado: O pó é homogêneo, fluxo livre e bege a bege avermelhado;
• Aparência Preparado: O meio preparado é ligeiramente turvo e de cor roxa avermelhada.

Resposta Esperada de Cultivo: incubado aerobiamente a 35 ± 2°C e examinado para crescimento após 18 - 24 horas.

Os organismos listados são os mínimos que devem ser avaliados para teste de controle de qualidade.

Procedimento do Teste:

Teste presuntivo para coliformes utilizando meio sólido:

1. Transfira uma alíquota de 1mL da amostra para uma placa de Petri;
2. Adicione 10mL do Ágar VRB (a 48°C) e misture com movimentos circulares;
3. Deixe o meio solidificar antes de incubar a 35ºC por 18 - 24 horas; use 32ºC para produtos lácteos;
4. Examine para colônias roxas avermelhadas, 0,5mm em diâmetro (ou maior), rodeadas por uma zona de ácidos biliares precipitados. Continue com testes confirmatórios para as colônias típicas dos organismos.

Resultados:
Os fermentadores de lactose são roxo avermelhados com ou sem uma zona de precipitados ao redor da colônia. As colônias de organismos não fermentadores de lactose são incolores a transparente. Coccus Gram-positivos são incolores, colônias localizadas.

Armazenamento:
Armazene o frasco contendo o meio desidratado devidamente fechado entre 2 - 30ºC. Uma vez aberto e fechado novamente, coloque o frasco em um ambiente de baixa umidade e na mesma temperatura de armazenamento. Proteja contra a umidade e luz mantendo o frasco firmemente fechado.

Validade:
Refira-se à data de validade no frasco. O meio desidratado deve ser descartado se não fluir livremente ou se houver mudança na coloração original. A validade se aplica ao meio em sua embalagem intacta quando armazenado como indicado.

Limitações do Procedimento:
Devido à variação nutricional, algumas cepas podem apresentar um crescimento fraco ou ausência de crescimento neste meio;
O Ágar VRB pode não inibir por completo os organismos Gram-positivos e permitem o crescimento de bacilos Gram-negativos além dos membros da família Enterobacteriaceae. Faça uma coloração de Gram e testes bioquímicos para identificar os isolados;
A ebulição do meio por um tempo maior do que 2 minutos pode diminuir a habilidade de crescimento.