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Ágar R2A

Utilizado para a contagem e cultivo de bactérias em água potável.

Princípios do Procedimento:
A Digestão Enzimática de Caseína, Digestão Enzimática de Tecido Animal e Hidrolisado Ácido de Caseína fornecem nitrogênio, carbono e minerais no Ágar R2A. O Extrato de Levedura é a fonte de vitaminas e microelementos. A Dextrose serve como a fonte de carbono. O Amido Solúvel ajuda na recuperação de organismos injuriados, absorvendo os metabólitos tóxicos. Fosfato Dipotássico é utilizado para balancear o pH e o Sulfato de Magnésio Heptahidratado é a fonte de cátions bivalentes e sulfato. O Piruvato de Sódio aumenta a recuperação de células injuriadas. O Ágar é o agente solidificante.

 

Fórmula: Litro:
Digestão Enzimática de Caseína 0,25g
Digestão Enzimática de Tecido Animal (Proteose Peptona) 0,25g
Hidrolisado Ácido de Caseína 0,5g
Extrato de Levedura 0,5g
Dextrose (Glicose) 0,5g
Amido Solúvel 0,5g
Fosfato Dipotássico 0,3g
Sulfato de Magnésio Heptahidratado 0,05g
Piruvato de Sódio 0,3g
Ágar 15g
pH Final: 7,2 ± 0,2 a 25ºC

 

Precauções:

  • Somente para o uso em laboratório;
  • Irritante para os olhos, sistema respiratório e pele.

Modo de Preparo:

  1. Suspenda 18,2g do meio em 1L de água purificada;
  2. Aqueça, agitando frequentemente e ferva por 1 minuto para dissolver completamente o meio;
  3. Autoclave a 121°C por 15 minutos.

Especificações de Controle de Qualidade:

Aparência do meio:

  • Aparência Desidratado: O pó é homogêneo, fluxo livre e bege claro a bege;
  • Aparência Preparado: O meio preparado é transparente a ligeiramente turvo e bege claro.

Resposta Esperada de Cultivo: incubado aerobiamente a 35 ± 2ºC e examinado para crescimento em 40 a 72 horas de incubação.

 

Micro-organismo: Inóculo Aproximado (UFC): Resultados Esperados:
Enterococcus faecalis ATCC 29212 10–300 Fraco a bom
Escherichia coli ATCC 25922 10–300 Regular a excelente
Staphylococcus aureus ATCC 25923 10–300 Fraco a bom

Os organismos listados são os mínimos que devem ser avaliados para o teste de controle de qualidade.

 

Procedimento do Teste:

  1. Prepare as diluições para a contagem de heterotróficos.
  2. Semeia as amostras e diluições por semeadura em superfície, semeadura em profundidade ou filtração
  3. por membrana. Não semeie mais de 1 mL de amostra ou diluição em superfície ou profundidade. O
  4. volume da amostra a ser filtrada através da membrana é variável.
  5. Em incubações prolongadas, mantenha níveis de umidade apropriados:
Temperatura de Incubação: Tempo Mínimo de Incubação: Tempo Ideal de Incubação:
35ºC 72 horas  5–7 dias
20 ou 28ºC 5 dias 7 dias

 


Resultados:

Conte as colônias semeadas em superfície ou em profundidade entre 30–300 colônias por placa ou 20–200 colônias ao utilizar o método de filtração por membrana. Calcule a contagem de colônias por mL de amostra multiplicando a média do número de colônias por placa pela diluição utilizada. Reporte a contagem como Unidades Formadoras de Colônia (UFC) por mL e reporte variações em incubações como temperatura e duração.

Armazenamento:
Armazene o frasco contendo o meio desidratado devidamente fechado entre 2–30°C. Uma vez aberto e fechado novamente, coloque o frasco em um ambiente de baixa umidade e na mesma temperatura de armazenamento. Proteja contra a umidade e luz mantendo o frasco firmemente fechado.

Validade:
Refira-se à data de validade no frasco. O meio desidratado deve ser descartado se não fluir livremente ou se houver mudança na coloração original. A validade se aplica ao meio em sua embalagem intacta quando armazenado como indicado.

Limitações do Procedimento:

  1. Devido à variação dos requerimentos nutricionais, algumas cepas podem apresentar um crescimento fraco ou ausência de crescimento neste meio.
  2. Ágar R2A é destinado somente para o uso em água potável tratada.
  3. O uso do método de semeadura em profundidade não é aconselhado pois a recuperação das bactérias injuriadas pode ser comprometida devido à elevação da temperatura (44–46°C) e baixa tensão de oxigênio, o que faz parte do procedimento.
  4. Um tempo de incubação prolongado pode ser necessário para a recuperação de bactérias com crescimento lento. 

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